全面檢測ALS相關SOD1突變體的混合型抗體

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono（MS785/MS27）

本產品為兩種針對SOD1突變體的抗體混合物。SOD1突變體被認為是導致神經性疾病肌wei縮性側索硬化(ALS)的原因之一，本產品可特異性識別SOD1突變體的共通二級結構，并且通過免疫沉淀后以Western blot或免疫染色等方法可以檢測出上百種SOD1突變體。

另外，本混合型抗體也適用于缺鋅性內質網應激相關的SOD1研究。詳細請瀏覽“MEMO——鋅缺乏和SOD1立體結構變化"。

※ 本產品僅供研究。研究以外不可使用。

※ 本產品基于東京大學 藥學系研究科 細胞情報學教室的研究成果產品化而成。

免疫沉淀后突變體SOD1的檢測實例

在HEK293細胞中表達野生型以及不同突變型SOD1，裂解細胞后添加各抗體（MS785：5 μg/mL, MS27：2 μg/mL, MS785/MS27混合：1 μg/mL）并反應10小時，然后使用Protein G 磁珠進行免疫沉淀。結果顯示，MS785和MS27在經過免疫沉淀反應后，未識別出野生型（WT）但與突變體特異性結合。在抗原位點出現突變時，MS785和MS27無法單獨識別，但是補充MS785/MS27混合體后，即可檢測出來。

◆肌wei縮性側索硬化（ALS）與SOD1

肌wei縮性側索硬化(ALS；Amyotrophic Lateral Sclerosis)是一種由于運動神經的細胞死亡導致全身骨骼肌無力、主要癥狀為肌肉wei縮的神經退行性疾病。90%的ALS為非遺傳性發病，10%左右為遺傳性發病，并且已經鑒定出了約20種致病基因。其中因氧化還原酶SOD1（Cu/Zn Superoxide Dismutase）的突變導致發病的案例最多，而表達SOD1突變體的轉基因小鼠也作為ALS的動物模型使用。借助各種研究手段我們有望闡明由SOD1突變導致的ALS發病機理。

SOD1是一種在活性中心帶有銅離子與鋅離子的金屬酶，主要負責分解細胞內產生的活性氧。雖然SOD1是一種相對較小的蛋白，只有154個氨基酸（人）、分子量僅為24 kDa，但是卻有著上百種突變體（圖1）。這些突變體基本不會影響分解天然活性氧的酶活性。因此，研究認為，ALS的發病中存在著酶活性以外的其他因素，而伴隨突變的毒性獲得（toxic gain of function）被視為極有可能的因素。

原本，野生型SOD1形成二聚體，但有關SOD1突變體，東京大學一條秀憲教授等人已澄清了的以下要點：

●　上百種各形各式的SOD1突變體采用了與野生型SOD1不同的共通二級結構（圖2）。

●　通過與內質網中的蛋白降解途徑（ERAD）的構成蛋白Derlin-1相結合獲得細胞毒性。

并且，以SOD1突變體與Derilin-1結合位點為基礎，成功開發出能夠特異性識別突變體立體結構的大鼠單克隆抗體，克隆MS785和MS27。這些抗體作為闡明SOD1突變引發的ALS發病機制的優秀工具備受期待。

圖1  報告中SOD1突變位點的案例

圖2 SOD1野生型與突變體的結構區別以及抗體識別位點

◆特點

●　混合了抗SOD1大鼠單克隆抗體克隆MS785和克隆MS27的混合型抗體。

※　亦可分別購入克隆MS785、MS27。

●　克隆MS785和MS27識別SOD1突變體共通的單體二級結構，且擁有在免疫沉淀后檢測出上百種SOD1突變體的實績。

●　可以通過免疫細胞染色法特異性檢測SOD1突變體。

●　在缺鋅條件下可以檢測作為內質網應激的原因之一的野生型SOD1二級結構變化。適用于內質網應激研究和SOD1基礎研究。詳細請瀏覽“MEMO——鋅缺乏和SOD1二級結構改變"。

◆抗體信息

■　關于克隆MS785與MS27的區別

●　MS785是以人SOD1的6~16氨基酸序列，MS27是以人SOD1的30~40氨基酸序列分別作為抗原制備的單抗。

●　均可廣泛地檢測突變體，但無法檢測到某些每個表位均有突變的特定突變體。

●　由于MS785和MS27有互補性，所以混合型抗體可以補全抗原位點突變體的檢測。

◆應用

●　免疫沉淀，免疫染色：突變體檢測

●　ELISA：突變體檢測（詳細請參考原著文獻2。）

●　Western blot：同時檢測突變體與野生型

注意：在變性狀態下，不僅會檢測到SOD1突變體，也會檢測到野生型SOD1。因此，實驗過程中必須防止蛋白變性，請勿使用SDS等變性劑。

◆原著文獻

1.　Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012).

1.　"A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral

1.　sclerosis-linked SOD1 mutants."

2.　Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015).

2.　"A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational

1.　alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

◆通過免疫染色對SOD1突變體的檢測實例

在HEK293細胞表達野生型以及G93A突變體SOD1（FLAG融合蛋白），分別使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合型抗體（紅）和抗FLAG抗體（綠）進行免疫染色（工作濃度：1 μg/mL）。可以確認，野生型以及G93A突變體均倍倍抗FLAG抗體檢測到信號，但是MS785、MS27以及MS785/27混合型抗體均不與野生型反應，僅與突變體反應。

◆缺鋅狀態下野生型SOD1的檢測實例

本抗體可檢測出缺鋅時野生型SOD1的動態結構變化。不僅ALS研究，也適用于SOD1的基礎研究。

●　本產品有在血清缺乏條件以及鋅螯合劑TPEN處理下檢測出內源性野生型SOD1的檢測實例。

●　MS785、MS27以及混合物都可用于檢測。

鋅缺乏和SOD1立體構造改變

OD1是擁有鋅離子的金屬蛋白。東京大學的一條教授等人明確，在缺鋅狀態下野生型SOD1會釋放鋅離子，改變二級結構，并采取SOD1突變體相似的單體結構。這種結構變化，令原本不結合的內質網相關性降解（ERAD）蛋白Derlin-1獲得結合能力，誘導了ER 應激（內質網應激）。即使是野生型SOD1，本產品也能識別出缺鋅狀態下的立體結構變化，檢測出缺乏鋅的SOD1。因此適用于SOD1基礎研究以及ER應激研究。

參考文獻：

1.  Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012).

1.  "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

2. Homma, et al., Molecular Cell, 52, 75～86 (2013).

1.  "SOD1 as a Molecular Switch for Initiating the Homeostatic ER Stress Response under Zinc Deficiency."

3. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015).

1.  "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

將HEK293細胞用10 μM鋅螯合劑TPEN處理8小時。細胞裂解后，分別使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合抗體進行免疫沉淀。由于鋅離子的缺失，內源性野生型SOD1與SOD1突變體同樣被MS785、MS27檢測出來。

◆儲存溫度

20°C

※ 本頁面產品僅供研究用，研究以外不可使用。