抗P2RY12，豚鼠

Anti P2RY12, Guinea Pig

P2RY12（也稱為 P2Y12）是一種腺苷 5'-二磷酸 (ADP) 受體，也是嘌呤能 G 蛋白偶聯(lián)受體 P2Y 家族的成員。它在外周組織的血小板中表達(dá)，也在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞（Homeostatic Microglia)中特異性表達(dá)。由于P2RY12幾乎不在巨噬細(xì)胞中表達(dá)，所以它是用于區(qū)分存在腦血管周圍的巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的有效標(biāo)志物^1）。此外，ADP可用作細(xì)胞損傷的信號(hào)，小膠質(zhì)細(xì)胞中的P2RY12被認(rèn)為在接收神經(jīng)細(xì)胞損傷方面發(fā)揮作用。

本產(chǎn)品為豚鼠來(lái)源多克隆抗體，可用于免疫組織染色的多重染色。

外觀：液體

濃度：蛋白濃度 0.45～0.65 mg/mL

◆抗體信息

※ 大鼠的染色實(shí)例請(qǐng)查看下方“數(shù)據(jù)"部分。

◆Protocol（示例）

  1.  灌注固定：使用檸檬酸鈉/PBS灌注除血后，4% PFA灌注

  2.  后固定： 4% PFA (～24 h)

  3.  蔗糖替換：30%蔗糖/PBS（4℃，過(guò)夜~約2天）

  4.  制備冰凍切片：去除蔗糖后，制備冰凍包埋塊，并用低溫恒溫器制備30 μm厚的切片

  5.  封閉：5% 正常山羊血清，0.3% Triton X-100/PBS（4℃，過(guò)夜）

  6.  一抗：抗 P2RY12，豚鼠（1︰1,000），1% 正常山羊血清，0.3% TritonX-100/PBS（4℃，過(guò)夜~2 天）

  7.  清洗：0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)

  8.  二抗：Alexa Fluor^® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) (1:500) （產(chǎn)品編號(hào)： 568-77901), 1% 正常山羊血清，

                 0.3% TritonX-100/PBS (室溫，2 h)

  9.  清洗：0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)

10.  封裝：封片劑封裝，4℃下避光存儲(chǔ)

◆數(shù)據(jù)

性能數(shù)據(jù)

▼ 與抗Iba1抗體比較

使用抗P2RY12抗體和抗Iba1抗體對(duì)小鼠大腦（冰凍切片）進(jìn)行免疫組織染色。

■ 使用抗體

P2RY12

一抗：抗 P2RY12，豚鼠（產(chǎn)品編號(hào)：011-28873，本產(chǎn)品）1︰1,000

二抗：Alexa Fluor^® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（產(chǎn)品編號(hào)：568-77901）

Iba1

一抗：抗iba1，兔源（免疫細(xì)胞化學(xué)用）（產(chǎn)品編號(hào)：019-19741）1︰1,000

二抗：Alexa Fluor^® 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (產(chǎn)品編號(hào)：566-80511)

【結(jié)果】

已確認(rèn)P2RY12信號(hào)和Iba1信號(hào)的共定位。

▼ 鑒別小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞

使用抗P2RY12抗體（小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物）、抗 Iba1抗體（小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞標(biāo)志物）和抗層粘連蛋白抗體（腦血管基底膜標(biāo)志物）對(duì)小鼠大腦皮層和延髓末端的冰凍切片進(jìn)行三重染色，確認(rèn)細(xì)胞定位。

■ 使用抗體

P2RY12

一抗：抗P2RY12，豚鼠（產(chǎn)品編號(hào)：011-28873，本產(chǎn)品）1︰1,000

二抗：Alexa Fluor^® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)產(chǎn)品編號(hào)：568-77901）

Iba1

一抗：抗iba1，兔源（免疫細(xì)胞化學(xué)用）（產(chǎn)品編號(hào)：019-19741）1︰1,000

二抗：Alexa Fluor^® 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (產(chǎn)品編號(hào)：566-80511)

層粘連蛋白

一抗：抗層粘連蛋白抗體（大鼠，宮田老師實(shí)驗(yàn)室制備）1︰200

二抗： DyLight™ 405 結(jié)合AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG (H+L)（生產(chǎn)商編碼：112-475-003）

【結(jié)果】

Iba1陽(yáng)性細(xì)胞中，腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞呈P2RY12陽(yáng)性，可能是小膠質(zhì)細(xì)胞（三角箭頭）。 而Iba1陽(yáng)性/P2RY12陰性的細(xì)胞存在于腦血管基底膜周圍，這些細(xì)胞可能是巨噬細(xì)胞（箭頭）。

▼ 與抗Iba1抗體和抗TMEM119抗體比較

使用抗P2RY12抗體、抗Iba1抗體和抗TMEM119抗體對(duì)小鼠大腦和脊髓（冰凍切片）進(jìn)行免疫組織染色。

■ 使用抗體

P2RY12

一抗：抗P2RY12，豚鼠（產(chǎn)品編號(hào)：011-28873，本產(chǎn)品）1︰1,000

二抗：Alexa Fluor^® 647 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（產(chǎn)品編號(hào)：566-78421）

Iba1

一抗：抗iba1，山羊源（產(chǎn)品編號(hào)：011-27991）1︰1,000

二抗：Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (產(chǎn)品編號(hào)：561-78351)

TMEM119

一抗：其他公司 抗TMEM119抗體 (兔源) 1︰100

二抗：Alexa Fluor^® 594-AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (產(chǎn)品編號(hào)： 561-78471)

【結(jié)果】

與抗TMEM119抗體相比，使用FUJIFILM Wako的抗P2RY12抗體染色能更清晰地檢測(cè)細(xì)微的突起結(jié)構(gòu)。

▼與其他公司產(chǎn)品比較

使用本產(chǎn)品和其他公司的抗P2RY12抗體對(duì)小鼠大腦和脊髓（冰凍切片）進(jìn)行免疫組織染色。

■ 使用抗體

本產(chǎn)品

一抗：抗 P2RY12，豚鼠（產(chǎn)品編號(hào)：011-28873，本產(chǎn)品）1︰1,000（抗體濃度：0.5 μg/mL）

二抗：Alexa Fluor^® 488 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（產(chǎn)品編號(hào)：562-78401）

其他公司產(chǎn)品

一抗：其他公司 抗P2RY12（兔源）1︰200（抗體濃度：0.5 μg/mL）

二抗：Alexa Fluor^® 488 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (產(chǎn)品編號(hào)：567-78451)

【結(jié)果】

傳統(tǒng)產(chǎn)品中可觀察到神經(jīng)細(xì)胞的非特異性信號(hào)（三角箭頭），而本產(chǎn)品中幾乎檢測(cè)不到非特異性信號(hào)。

◆應(yīng)用數(shù)據(jù)

▼ 免疫組織染色

小鼠

	物種：小鼠 部位：海馬體 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰500 <數(shù)據(jù)提供> 御茶水女子大學(xué)人類生命科學(xué)研究所 橋本老師		物種：小鼠 部位：海馬體 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰1,000 備注：活化處理        （檸檬酸鈉緩沖液） <數(shù)據(jù)提供> 御茶水女子大學(xué)人類生命科學(xué)研究所 橋本老師
	物種：小鼠 部位：正中隆起 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰1,000 <數(shù)據(jù)提供> 旭川醫(yī)科大學(xué) 解剖學(xué)講座 機(jī)能形態(tài)學(xué)領(lǐng)域 古部老師		物種：小鼠 部位：脊髓 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰2,000 <數(shù)據(jù)提供> 九州大學(xué) 大學(xué)院藥學(xué)研究院 藥理學(xué)領(lǐng)域 津田老師 河野老師

大鼠

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