簡(jiǎn)要描述：CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0 使用新型染料檢測(cè)自噬小泡和監(jiān)控活細(xì)胞自噬流，選擇性標(biāo)記積累的自噬小泡。染料已通過優(yōu)化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明 亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細(xì)胞轉(zhuǎn)染，可以在活細(xì)胞中監(jiān)控細(xì)胞自噬的快速定量方法。
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CYTO-ID® 自噬檢測(cè)試劑盒 2.0
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0 使用新型染料檢測(cè)自噬小泡和監(jiān)控活細(xì)胞自噬流，選擇性標(biāo)記積累的自噬小泡。染料已通過優(yōu)化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明 亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細(xì)胞轉(zhuǎn)染，可以在活細(xì)胞中監(jiān)控細(xì)胞自噬的快速定量方法。
◆特點(diǎn)
● 更明亮，更耐光，特異性染色自噬小泡
● 無需轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證
● 快速量化原生異質(zhì)性細(xì)胞群中的自噬
● 不染溶酶體，減少其他染料的背景干擾
● 便于高通量篩選自噬激活劑和抑制劑
◆原理
該產(chǎn)品所用探針是陽(yáng)離子兩親性示蹤劑（CAT）染料，以類似誘導(dǎo)磷脂藥物的方式迅速進(jìn)入到細(xì)胞中。染料的功能基團(tuán)能夠選擇性標(biāo)記與自噬通路相關(guān)的小泡，而不會(huì)在溶酶體中聚集。
胞內(nèi)物質(zhì)被擴(kuò)大的膜囊包裹，吞噬泡形成雙層膜囊泡，成為自噬體。自噬體外膜隨后與溶酶體融合，和內(nèi)部物質(zhì)被自噬性溶酶體降解。自噬的各種調(diào)節(jié)因子也被描繪于圖中。 |
自噬原理圖 |
◆應(yīng)用
CYTO-ID® 綠色檢測(cè)試劑2（A組）在PBS確定的吸光度和熒光圖譜（499/548 nm）。 Hoechst33342（圖B）在1X測(cè)定緩沖液來確定的吸光度和熒光圖譜（350 /461 nm）。 | 的發(fā)放 |
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HeLa cells使用 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2進(jìn)行染色 (A) 培養(yǎng)基 (B) 在饑餓培養(yǎng)基 (EBSS)中添加40 µM Chloroquine培養(yǎng)4 h 。在含有Chloroquine 的EBSS培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞表現(xiàn)非常明亮的綠色熒光信號(hào)和點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)。 |
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運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析Jurkat細(xì)胞的自噬 通過0.5 µM Rapamycin (RAP), 10 µM Chloroquine (CLQ)處理或不處理Jurkat細(xì)胞，或兩者一起處理20 h。CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30 min后，洗脫，用流式細(xì)胞儀分析。直方圖疊加呈現(xiàn)結(jié)果。用RAP+CLQ處理細(xì)胞顯示熒光有升高。 |
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微孔板分析HepG2細(xì)胞的自噬 HepG2經(jīng)過DMSO（對(duì)照），0.5 μM Rapamycin (Rap), 10 µM Chloroquine (CLQ),或0.5 µM Rap 和10 µM CLQ同時(shí)培養(yǎng)20 h。細(xì)胞經(jīng)過Hoechst 33342染色進(jìn)行細(xì)胞數(shù)目標(biāo)準(zhǔn)化。Rap 和CLQ同時(shí)處理細(xì)胞顯示自噬作用上升。 |
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相關(guān)產(chǎn)品資料請(qǐng)點(diǎn)擊下載：活細(xì)胞熒光分析 Ver.3
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級(jí) | 備注 |
| ENZ-KIT175-0200 | Cyto-ID® Autophagy detection kit 2.0 CYTO-ID®自噬檢測(cè)試劑盒2.0 | 200 tests | － | - |
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